使用奥林巴斯体视显微镜 SZ61 进行斑马鱼器官组织的荧光观察,可参考以下步骤:
观察前准备
斑马鱼样品制备:选择合适发育阶段的斑马鱼胚胎或幼鱼,例如两天大的幼鱼。在斑马鱼产下胚胎后,将其分离并饲养在 28 摄氏度的 E3 水溶液中,在最初的 24 小时里加入 0.003% 1 - 苯基 - 2 - 硫脲溶于 10% 生理盐水的 PTU 溶液,以抑制斑马鱼早期的色素分泌,保持其透明性。成像前,将斑马鱼固定在琼脂糖中,具体是加热熔解 1% 的琼脂糖并铺满培养皿底部,冷却凝固后,将斑马鱼幼鱼携带少量 E3 溶液释放在琼脂糖上,再滴加 1-2 滴熔解的琼脂糖并冷却凝固,最后加入 E3 溶液。
显微镜荧光附件安装:安装荧光附件,包括荧光光源及滤光片。根据实验中使用的荧光标记物的激发和发射波长,选择合适的荧光滤光片。
显微镜操作
开启与调节:打开显微镜电源开关,旋转亮度调节按钮,调节荧光光源到适当的亮度。
样品放置:将固定有斑马鱼的培养皿放在显微镜工作台上。
对焦与观察:调节对焦旋钮,使镜臂上下移动,让焦点落在标本上,获得清晰的图像。通过目镜观察荧光标记的器官组织的形态和结构,同时可转动变倍筒左右侧的变倍旋钮,根据需要改变样品图像的放大倍数,以观察不同层次的细节。若有需要,可调整观察筒的距离和屈光度,以适应不同观察者的眼睛状况。
观察与记录
观察内容:注意观察荧光标记在斑马鱼器官组织中的分布情况,例如特定基因表达导致的荧光蛋白在某个器官中的特异性表达,或者荧光染料标记的细胞在组织中的位置和形态等。
图像记录:如果显微镜配备了数码摄像头,可将其连接到显微镜的三目镜筒上,通过相关软件界面观察样品图像,并进行实时记录和分析,方便后续进一步研究和对比。
观察后处理
关闭电源:观察结束后,关掉电源,取走样品。
清洁与维护:对显微镜进行清洁,用干净的软布擦拭镜头和载物台等部件,防止灰尘和污渍影响下次使用。将显微镜用防尘罩严密保护起来,以防止灰尘进入光学系统和其他部件。