一、SZ61 体视显微镜的技术特点与观察优势

• 立体观察能力：采用伽利略光学系统，提供 10:1 连续变倍（放大倍数通常为 6.7×~45×），可直观呈现孢子排列的三维空间关系。

• 工作距离：长工作距离（约 110mm），适合放置培养皿、载玻片等样本，避免物镜触碰样本。

• 照明方式：

• 透射光（底部光源）：适合透明或浅色孢子样本（如载玻片制片）。

• 反射光（顶部光源）：适合不透明样本（如菌落表面的孢子层），可增强立体感。

二、孢子样本的制备与预处理

（一）适合体视显微镜的样本类型

1. 未制片样本（直接观察）

• 培养皿中的真菌菌落：直接置于载物台上，观察菌落表面孢子堆的排列（如曲霉的孢子头、青霉的帚状分支）。

• 自然基质上的真菌（如果实、叶片霉斑）：剪下病斑部位，直接放置观察。

2. 简易制片方法（保持排列完整性）

• 胶带粘取法：

• 载玻片压片法：

1. 取少量菌落置于载玻片，滴加无菌水或乳酸酚棉蓝。

2. 用另一载玻片轻压样本，使孢子层分散但不破坏排列，沿水平方向推开多余液体。

3. 用透明胶带（无菌）轻压菌落表面，粘取孢子层。

4. 胶带粘面朝下贴于载玻片，滴 1 滴甘油（防止干燥），盖上盖玻片（避免气泡）。

（二）染色与对比度增强

• 适用场景：当孢子与菌丝颜色相近或背景复杂时，可采用：

• 乳酸酚棉蓝染色：同上，使孢子呈蓝色，背景透明（适合透射光观察）。

• 印度墨汁负染：孢子周围背景变黑，突出无色孢子的轮廓（适合反射光观察）。

三、孢子排列方式的观察步骤与特征解析

（一）显微镜操作流程

1. 参数调节

• 先将变倍旋钮调至最低倍数（6.7×），放置样本后缓慢调大倍数。

• 调节双目镜间距至双眼视野重合，通过屈光度调节环（目镜两侧）消除重影。

• 透射光与反射光可同时开启，通过光强旋钮和滤光片（如磨砂玻璃）减少反光。

2. 三维观察技巧

• 旋转载物台或移动样本，从不同角度观察孢子排列的空间分布。

• 调节焦距旋钮，逐层聚焦（因体视显微镜景深大，可观察到不同深度的孢子层）。

（二）常见孢子排列方式与典型特征

四、图像记录与定量分析

1. 拍摄参数优化

• 使用显微镜配套数码相机或手机连接目镜拍摄，开启防抖功能。

• 反射光下可搭配黑色背景板，突出孢子排列的立体感；透射光下调节亮度至孢子颜色饱和。

2. 定量分析指标

• 排列密度：在低倍镜下选取 1mm² 区域，统计孢子数量及聚集程度。

• 空间分布模式：用绘图软件标记孢子位置，分析是否符合随机、均匀或集群分布。

• 特征测量：通过软件标尺测量孢子链长度、孢子头直径、孢子间距等（需在相同放大倍数下）。

3. 动态观察应用

• 定时拍摄同一区域，记录孢子排列随培养时间的变化（如曲霉孢子头从形成到崩解的过程）。

五、注意事项与问题解决方案

• 样本变形控制：

• 胶带粘取时避免用力按压，防止孢子链断裂；压片法力度适中，避免孢子挤压变形。

• 反光干扰处理：

• 反射光过强时，可在光源前加磨砂纸或使用环形偏光镜，减少菌落表面光泽影响。

• 重叠孢子分辨：

• 通过调节焦距，聚焦不同深度的孢子层，或拍摄多层图像后用软件合成全景图。

• 污染风险预防：

• 观察真菌样本时需佩戴手套，样本后用 75% 酒精擦拭载物台，避免交叉污染。

六、延伸技术：结合 SZ61 的立体观察优势

• 荧光辅助观察（需配件）：若配备荧光模块，可对荧光标记的孢子（如 GFP 标记）进行三维定位。

• 显微操作联用：利用长工作距离，搭配显微针在观察状态下挑取单个孢子或孢子链（用于单孢分离）。

• 三维重建分析：拍摄多层焦平面图像后，用 Imaris 等软件重建孢子排列的三维模型，量化空间分布参数。